細胞膜熒光探針是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位△4 m的理想熒光探針?？梢詸z測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。在線粒體膜電位較高時，細胞膜熒光探針聚集在線粒體的基質(zhì)中，形成聚合物，可以產(chǎn)生紅色熒光；在線粒體膜電位較低時，細胞膜熒光探針不能聚集在線粒體的基質(zhì)中，此時細胞膜熒光探針為單體，可以產(chǎn)生綠色熒光。這樣就可以非常方便地通過熒光顏色的轉(zhuǎn)變來檢測線粒體膜電位的變化。常用紅綠熒光的相對比例來衡量線粒體去極化的比例。
線粒體膜電位的下降是細胞凋亡早期的一個標志性事件。通過細胞膜熒光探針從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變可以很容易地檢測到細胞膜電位的下降，同時也可以用細胞膜熒光探針從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變作為細胞凋亡早期的一個檢測指標。單體的Zui大激發(fā)波長為 515nm，Zui大發(fā)射波長為529nm；聚合物的Zui大激發(fā)波長為585nm，Zui大發(fā)射波長為590nm 。實際觀察時，使用常規(guī)的觀察紅色熒光和綠色熒光的設置即可。
染色步驟：
1、于6-，12或24-孔板上進行細胞鋪板，密度為5×105 cells/mL。37℃，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。選擇合適的化合物根據(jù)特定的步驟進行凋亡誘導。 注：進行凋亡誘導時的細胞密度建議不超過1×106 cells/mL，也可根據(jù)自己的細胞類型培養(yǎng)至合適的密度。
2、取0.5 mL細胞懸液至無菌的離心管內(nèi)。
3、室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清。
4、用0.5 mL
細胞膜熒光探針工作液重懸細胞，于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱孵育15-30 min；注意：一般情況，15 min足以進行充分的染色。
5、室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清。
6、用2 mL細胞培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細胞，之后室溫條件400 x g離心5 min；吸掉上清。
7、重復步驟6。
8、用0.5 mL新鮮培養(yǎng)液或者緩沖液重懸細胞，即可進行后續(xù)的流式分析。
注意事項：
1、如果一次使用量較小，需把每管再適當進行分裝，盡量避免反復凍融。
2、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
